Milieux de culture Déshydratés

Le Malt agar est une gélose à l’extrait de malt pour la recherche des Levures et Moisissures.

Complément : acide lactique.

Dissoudre 48 g/l, ajuster le pH à 4,5 par addition d’une solution stérile d’acide lactique à 10%. Incubation 3/5 jours à 20/25 °C à la lumière.

Composition du Malt agar :
Extrait de malt : 30,0
Peptone de farine de soja : 3,0
Agar agar : 15,0
pH final 5,5 ± 0,2 à 25 °C

La gélose Mueller Hinton II (Mueller Hinton II Agar) est utilisée dans la méthode standardisée de test par diffusion sur disque pour déterminer la sensibilité des isolats cliniques des organismes aérobies à croissance rapide vis-à-vis des agents antimicrobiens.

La méthode Bauer-Kirby consiste à diffuser au travers d’une gélose des substances antimicrobiennes imprégnées sur des disques de papier. Des méthodes plus anciennes, qui faisaient appel à des disques aux concentrations antimicrobiennes faibles et élevées, fondaient l’interprétation des résultats sur la présence ou l’absence de zones d’inhibition. Aujourd’hui, ce procédé s’appuie sur des disques à concentration constante d’agents antimicrobiens et les diamètres des zones sont comparés aux concentrations minimales d’inhibition (CMI). Dans le mode opératoire du test, une suspension standardisée de l’organisme est écouvillonnée sur toute la surface du milieu. Des disques de papier imprégnés d’une quantité déterminée d’antibiotique ou d’autres agents antimicrobiens sont alors placés contre la surface du milieu. La boîte de Pétri est incubée, puis les zones d’inhibition qui apparaissent autour de chaque disque sont mesurées. La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S), intermédiaire (I) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux 2A à 2D figurant dans le document CLSI M100 (M2). La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux des concentrations critiques fixées par l'EUCAST. Divers facteurs ont été identifiés comme influençant les tests de sensibilité par diffusion sur disque. Ce sont notamment le milieu et l’excès d’humidité à sa surface, la profondeur de la gélose, l’activité des disques, la concentration de l’inoculum, le pH et la production de ß-lactamase par les microorganismes testés.

La Mueller Hinton Agar est un milieu standard utilisé lors des tests de sensibilité des aérobies à croissance rapide ou des organismes bactériens anaérobies facultatifs, par exemple les staphylocoques, les entérocoques, la famille des Enterobacteriaceae et les bâtonnets aérobies Gram-négatifs (ex. les espèces de Pseudomonas). Les documents de référence pour l'interprétation de la sensibilité sont mis à jour tous les ans. La version la plus récente doit être consultée afin d'interpréter correctement les résultats obtenus. Diverses méthodes ainsi que d'autres milieux et conditions ont été développés pour les espèces exigeantes, par exemple les espèces Haemophilus spp., Neisseria spp. et Streptococcus pneumoniae et les streptocoques.

Le bouillon M-Green levure et moisissure est utilisé pour la détection des champignons en analyse de routine des boissons.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La formulation est riche en nutriments fournis par les peptones, l’extrait de levure et le dextrose, mais la croissance bactérienne est inhibée par un pH acide. La diastase est un mélange amylolytique d’enzymes (hydrolyse d’amidon). L’indicateur vert de bromocrésol facilite la visualisation et le comptage des colonies fongiques. Les colonies sont vertes, ce qui est dû à la diffusion du vert de bromocrésol dans les colonies (réaction alcaline). Les produits finis des colonies diffusent  dans le milieu, réduisant encore le pH et provoquant un virage du colorant au jaune (réaction acide).

RESULTATS ATTENDUS

Après incubation, les colonies apparaissant à la surface du filtre peuvent être comptées. Les colonies de moisissures apparaissent généralement vertes et filamenteuses alors que les colonies de levures sont vertes et opaques.

BD Milieu de culture déshydraté Difco™ : Milieu ISP 2

Le milieu EC avec MUG est utilisé pour détecter Escherichia coli dans l'eau, les aliments et le lait.

Poudre pour la production interne de NBB-A et de NBB-B en utilisant de la bière de sa propre production.

Fraction soluble d’extrait autolytique de levure, base pour milieux de culture.

La gélose Mitis Salivarius est utilisée avec la solution Tellurite 1% (416.215294.02) pour isoler Streptococcus mitis, S. salivarius (streptocoques non hémolytiques) et les entérocoques (streptocoques fécaux), en particulier à partir d'échantillons gravement contaminés.

S. mitis produit de petites ou minuscules colonies bleues. Ces colonies peuvent devenir plus faciles à distinguer avec une incubation plus longue.
S. salivarius produit des colonies bleues, lisses ou rugueuses, de 1 à 5 mm de diamètre selon le nombre de colonies sur la plaque.
Les espèces d'entérocoques forment des colonies bleu foncé ou noires, brillantes, légèrement surélevées, de 1 à 2 mm.

Gélose TSAYE, un milieu universel convenant pour un large éventail d’emplois. Il est essentiellement utilisé pour l’isolement et la purification des micro-organismes dont les colonies sont obtenues sur les milieux d’isolement sélectif (Palcam, Oxford, Listeria Chromagar…) destinés à la recherche ou à la numération des Listeria en particulier des Listeria monocytogenes.

Composition :

Tryptone : 17,0
Peptone papaïnique de soja : 3,0
Extrait autolytique de levure : 6,0
Glucose : 2,5
Phosphate dipotassique : 2,5
Chlorure de sodium : 5,0
Agar : 11,0
pH final 7,3 ± 0,2 à 25 °C

TSN Agar (Trypticase™ Sulfite Neomycin, ou gélose TSN) est utilisée pour l’isolation sélective de Clostridium perfringens.

La gélose TSN a été développée par Marshall et al. comme un milieu qui aboutit rapidement à l’énumération de Clostridium perfringens. La formulation est une modification du milieu Mossel pour l’énumération des clostridies sulfitoréductrices dans les aliments. La température d’incubation de 46°C de la gélose TSN permet d'obtenir des résultats spécifiques et quantitatifs.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La néomycine et la polymyxine sont des inhibiteurs pour les entérobacilles Gram-négatives. La néomycine à la concentration utilisée inhibe partiellement C. bifermentans. L’incubation à haute température 46°C rend le milieu hautement spécifique de C. perfringens. Les colonies sont noires en raison de la formation de sulfure ferrique suite à la réduction du sulfite.