Milieux de culture

ANTIBIOTIC MEDIUM 11 BD 259310-500G

Les milieux d'antibiotiques Medium 11 sont utilisés pour déterminer l'activité des antibiotiques par la technique d'essai microbiologique.
Ces milieux antibiotiques  répondent aux spécifications de performance de la United States Pharmacopeia (USP).

La méthode par disque:
Cette méthode est basée sur la diffusion d'une solution antibiotique d'un disque placé à la surface d'un milieu gélosé inoculé.
Le diamètre d'une zone d'inhibition après incubation dépend, en partie, de la concentration ou de l'activité de l'antibiotique.
 

Composition du milieu Antibiotic Medium 11 pour 1 litre:
- Extrait de boeuf : 1,5g
- Extrait de levure : 3,0g
- Caséine de digestion pancréatique : 4,0g
- Peptone : 6,0g
- Dextrose : 1,0g
- Agar : 15,0g

La Solution d'antibiotique Medium 11 est à 3,05%, soluble dans l'eau purifiée après l'ébullition.
La solution est de couleur ambre clair à moyen.

Antisérums Poly Cholerae Difco™

L’antisérum Poly Vibrio Cholerae est recommandé pour réaliser les tests d’agglutination sur lame servant à l’identification et au sérotypage de Vibrio cholerae.

Préparation :

Utiliser le Difco Vibrio Cholerae Antiserum Poly pour tester les isolats de V. cholerae présomptifs. Poursuivre le test avec le Difco Vibrio Cholerae Antiserum Ogawa et le Difco Vibrio Cholerae Antiserum Inaba.

1. Déposer 1 goutte du Difco Vibrio Cholerae Antiserum à tester sur une lame à agglutination.
2. A l’aide d’un ensemenceur, transférer une pleine anse de culture bactérienne à analyser dans la goutte d’antisérum et bien mélanger.
3. Agiter pendant 1 min par un mouvement de rotation de la lame, puis observer s’il se produit une réaction d’agglutination.

La gélose marine 2216 (Marine Agar 2216) est utilisée pour la culture des bactéries marines hétérotrophiques.

GELOSE m FC BD 267720-500G

La gélose m FC est utilisé avec l'acide rosolique pour le développement et le dénombrement des coliformes fécaux sur membrane filtrante pour analyses de l'eau.

Les apports du milieu m FC:
- Les peptones apportent les sources de carbone, d'azote, de vitamines et de protéines.
- Le lactose est une source de carbone.
- Les sels biliaire inhibent la croissance de bactéries Gram -
- L'agar joue son rôle de solidifiant.
- Le bleu d'anniline et l'acide rosolique sont les indicateurs différentiels

Interprétations :
Les coliformes fécaux se distinguent par les colonies bleues
Les coliformes non fécaux et les autres organismes forment des colonies gris à crème.

Composition du milieu :
- Tryptose : 10,0 g
- Peptone protéose n°3 : 5,0 g
- Extrait de levure : 3,0 g
- Lactose : 12,5 g
- Sels biliaire n°3 : 1,5 g
- Chlorure de sodium : 5,0 g
- Agar : 15,0 g
- Bleu d'aniline : 0,1 g

M ENDO AGAR LES BD 273620 - 500G

m Endo Agar LES est utilisé pour le dénombrement des coliformes dans l'eau par filtration sur membrane.

Les apports du milieu m Endo LES:
- Les peptones apportent les sources de carbone, d'azote, de vitamines et de minéraux.
- L'extrait de levure fournit vitamines du complexe B, qui stimulent la croissance bactérienne.
- Le lactose est l'hydrate de carbone.
- Les phosphates sont des agents tampons.
- Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu.
- Le sodium désoxycholate  et le lauryl sulfate de sodium sont des inhibiteurs.
- La fuchsine basique est un indicateur de pH.
- Le sulfite de sodium est ajouté pour décolorer la solution de fuchsine basique.
- L'agar est l'agent solidifiant.

Le bouillon lactosé bilié au vert brillant est pour la recherche des coliformes dans la nourriture, les produits laitiers, l'eau et les eaux usées.
Ce bouillon (Brilliant Green Bile Broth 2%) contient 2 inhibiteurs pour chaque Gram (+) et Gram(-) sélectionnés. Les microorganismes, principalement les coliformes, qui sont résistants à l'action des inhibiteurs et qui fermentent le lactose, sont capables de se répliquer dans ce milieu. La fermentation est détectée par la production de gaz.

Préparation :
Dissoudre 40 g/l
Répartir en tubes munis de cloches de Durham
Stériliser à 120 °C pendant 15 minutes
Incubation pour les Coliformes 24 et 48 h à 30 °C, pour les Coliformes fécaux et Escherichia coli 24 et 48 h à 44 °C

Composition :
Tryptone : 10,0
Bile de boeuf : 20,0
Lactose : 10,0
Vert brillant : 0,0133
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Le bouillon de nitrate de DIFCO est un milieu de base recommandé comme aide à l'identification des microorganismes gram-négatifs anaérobies facultatifs et aérobies grâce au test de réduction des nitrates.
Grâce à l'ajout de différents réactifs et/ou d'une cloche de Durham (197.100593.02), il est possible de déterminer le type bactérien.

Avant l'inoculation du bouillon de nitrate, l'organisme à tester doit avoir été préalablement isolé sur un autre milieu solide approprié. L'utilisation d'une culture pure est essentielle à la bonne réalisation du test.

Composition :

Extrait de bœuf............................. 3,0 g
Peptone....................................... 4,0 g
Peptone protéique n°3................... 1,0 g
Nitrate de potassium..................... 1,0 g

Le Tétrathionate broth base est un bouillon d’enrichissement pour les Salmonelles.

Compléments : iode, iodure de potassium, vert brillant, novobiocine (éventuellement).

Préparation :
Dissoudre 46 g/l. Porter à ébullition lentement en agitant, maintenir l’ébullition pendant 2 minutes. Ne pas autoclaver.
Avant utilisation ajouter 20 ml d'une solution contenant 5 g d'iodure de potassium et 6 g d'iode, puis 10 ml d'une solution aqueuse de vert brillant à 1‰ stérile. Répartir en tubes ou flacons stériles.
Ensemencer 100 ml avec 10 ml d'une culture sur milieu de pré-enrichissement.
Incuber de 18 à 24 h à 37 °C.

Composition :
Protéose peptone : 5,0
Sels biliaires : 1,0
Carbonate de calcium : 10,0
Thiosulfate de sodium : 30,0
pH final 8,0 ± 0,2 à 25 °C

La gélose au Rouge de phénol et au Mannitol permet de mettre en évidence les bactéries basées sur des réactions de fermentation du mannitol.

L'avantage d'un milieu de fermentation solide est qu'il permet d'observer la fermentation du mannitol en conditions aérobies et anaérobies.

Composition pour une préparation de 1 Litre :
Protease Peptone : 10 g
Extrait de boeuf : 1 g
D-Mannitol : 10 g
Chlorure de Sodium : 5 g
Agar : 15 g
Rouge de phénol : 25 mg

Le peptone fournit le carbone et l'azote nécessaires à une bonne la croissance d'une grande variété d'organismes.
Chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu.
L'agar est l'agent solidifiant.
Le rouge de phénol est l'indicateur de pH, en virant de rouge-orange à jaune lorsque de l'acide est produit pendant la fermentation.
Le milieu reste rouge ou devient alcalin (rouge plus foncé).

Trypticase Soja Agar BD™

Trypticase Soja Agar BD™ (TSA) est un milieu à usage général est utilisée pour l'isolement et la culture de microorganismes exigeants ou non. 
Il n'est pas recommandé de l'utiliser pour l'isolement primaire de micro-organismes à partir d'échantillons cliniques, mais peut être utilisé pour la sous-culture de souches bactériennes isolées à partir d'échantillons cliniques afin d'obtenir des cultures pures et pour une différenciation et une identification supplémentaires.

Composition (pour 1Litre) :

Digest pancréatique de caséine 15,0 g
Digest papaic de soja 5.0
Chlorure de sodium 5,0
Gélose 15,0
pH 7,3 ± 0,2