Milieux de culture Suppléments

La solution TTC 1% Difco™ (Triphenyltetrazolium Chloride) est prête à l’emploi pour la préparation de milieu de culture.

La solution TTC 1% est préparée à partir de 2,3,5 triphenyltetrazolium chloride destinée à la microbiologie. Elle est utilisée comme un indicateur redox dans les milieux de culture pour la différenciation bactérienne. Chapman a expliqué que l’ajout de TTC à la gélose Tergitol™ permettait la détection et la confirmation de E. coli après seulement 10 heures d’incubation. Chapman a aussi expliqué que la gélose Tergitol 7 avec ajout de TTC donnait un milieu sélectif pour la détection et l’isolement de Candida albicans. Chapman ajoutait du TTC, Tergitol 7 et du pourpre de bromocrésol à la gélose Sabouraud au Malt pour l’isolement et l’identification de C. calbicans et autre champignon. Pagao, Levin et Trejo incorporaient du TTC dans la base Pagano Levin pour la détection et l’isolement des espèces de Candida.

Slanetz et Bartley utilisaient le TTC dans la gélose m-Enterococcus pour l’énumération des entérocoques. Sur ce milieu les colonies apparaissent de couleur rose à marron foncé. Kenner, Clark et Kabler utilisaient le TTC avec la gélose KF Streptococcus et le bouillon pour détecter et énumérer les streptocoques à la surface de l’eau.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La solution TTC 1% est utilisée comme un indicateur redox pour les milieux de culture pour la différenciation bactérienne. Elle est incolore dans sa forme oxydée et est réduite en triphénylformazan par des systèmes réducteurs. La formation du formazan est une réaction irréversible. Une fois que le microorganisme réduit l’indicateur, la couleur rouge persiste.

Emulsion stérile de jaune d’œuf à la Polymyxine B pour gélose sélective pour le dénombrement de Bacillus cereus selon Mossel.

Préparation:

- Dans chaque flacon de 90 mL de milieu de base, ajouter stérilement 10 mL d’émulsion stérile de jaune d’œuf avec Polymyxine B (BS055).
- Homogénéiser parfaitement.
- Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.

Composition:

- Polymyxine B (sulfate) : 5x10^4 UI
- Emulsion stérile de jaune d’œuf : 50,0 mL

Gélose OXFORD

DESCRIPTION:

La gélose Oxford est un milieu sélectif utilisé pour l’isolement et la détection de Listeria monocytogenes et des autres Listeria dans les produits alimentaires, même fortement contaminés.
Le milieu peut être utilisé comme second milieu au choix dans le cadre de la méthode de recherche de Listeria monocytogenes en microbiologie des aliments (NF EN ISO 11290-1).

CONDITIONNEMENT

Milieu déshydraté :
BK110HA - Flacon de 500 g

Supplément pour gélose Oxford (CCCFA) :
BS00308 - 10 flacons qsp 500 mL

Le supplément bouillon Fraser est utilisé avec la base bouillon Fraser dans l’enrichissement sélectif et la détection de Listeria.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La différenciation de Listeria des autres bactéries est facilitée en incluant le citrate d’ammonium ferrique (Difco™ Fraser Broth supplement) dans le milieu final. Puisque toutes les espèces de Listeria hydrolysent l’esculine, l’ajout d’ions ferriques dans le milieu détectera la réaction. Un noircissement du milieu par les cultures contenant des hydrolysats bactériens est le résultat de la formation de la 6,7-dihydroxycoumarine (esculétine) qui réagit avec les ions ferriques.

REACTIFS

Formule approximative pour 10mL
Citrate d’ammonium ferrique : 0,5g

Supplément sélectif pour bouillon Fraser demi, pour l'enrichissement des Listeria.

Préparation:

- Reconstituer le supplément lyophilisé sélectif pour Fraser ½ Qsp 500 mL (BS030) avec 5 mL d’une solution 1:1 éthanol / eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter 2,25 mL de supplément reconstitué BS030 dans chaque flacon de 225 mL de bouillon.
- Homogénéiser parfaitement

Composition:

- Acide nalidixique : 5,00 mg
- Acriflavine (chlorhydrate) : 6,25 mg
- Citrate de fer (III) ammoniacal : 0,25 g

Supplément sélectif pour le dénombrement des Entérocoques dans les eaux

Le supplément TTC 50 mg est un indicateur de la croissance bactérienne. Il est utilisé avec la gélose de Slanetz et Bartley (base) ou la gélose KF (base), pour le dénombrement des entérocoques dans les eaux d'alimentation, les boissons, les eaux usées et divers produits biologiques; aussi bien par la technique de filtration sur membranes que par la méthode classique de numération en boîtes de Petri. 

Préparation:

- Reprendre le lyophilisat en y ajoutant aseptiquement 5 mL d'eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter 1 mL de supplément réhydraté à 100 mL de gélose portée à ébullition et maintenue à 44-47 °C.

Composition:

- Triphényltétrazolium (chlorure) : 50,0 mg

La gélose PALCAM est un milieu sélectif utilisé pour la différenciation et l’isolement de Listeria monocytogenes et des autres Listeria dans les produits alimentaires tels que le lait et les fromages, ainsi que dans les autres denrées alimentaires même fortement contaminées.
Le milieu peut être utilisé comme second milieu au choix dans le cadre de la méthode de recherche de Listeria monocytogenes en microbiologie des aliments (NF EN ISO 11290-1).
La gélose PALCAM peut également être utilisée comme test de confirmation de Listeria spp dans la méthode COMPASS Listeria.

Le supplément selectif sous forme liquide pour milieu la selectif des Salmonelles . Il est utilisé dans la complémentation du milieu IRIS Compass salmonella Agar (770.007008.00).

IRIS Salmonella® est certifiée NF VALIDATION, selon le protocole de validation NF EN ISO 16140-2 de 2016 pour tous produits d’alimentation humaine et animale, ainsi que les échantillons de l’environnement de production industrielle.

Composition en gramme par litre

- Système séléctif: 2.0g

- Colorant 0.1g

Le Tergitol 7 agar  est utilisé pour la recherche et le dénombrement des Coliformes sur membrane.
milieu de base: TTC TERGITOL 7 ref: 250.033981.54
Préparation :
Dissoudre 51,10 g/l
Autoclaver 15 minutes à 115 °C
Après refroidissement à 45/50 °C, ajouter :
1 ml/100 ml d’une solution stérile de TTC à 0,05%
 

Composition en g/L.
Peptone de viande : 10,0
Extrait de levure : 6,0
Extrait de viande : 5,0
Lactose : 20,0
Bleu de bromothymol : 0,05
Tergitol 7 : 0,1
Agar agar : 12,7
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Ensemencement :
Ensemencer par étalement en surface ou en disposant une membrane
Incuber pendant 21 h ± 3 heures à 36 °C ± 2 °C

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu d'Oxford agar.

A 500 ml d'Oxford agar, ajouter stérilement le contenu d'un flacon de supplément SR 140 reconstitué avec 5 ml d'éthanol/eau distillée stérile à parties égales.

Composition :
Cycloheximide : 0,200
Colistine (sulfate) : 0,010
Acriflavine : 0,0025
Cefotetan : 0,001
Fosfomycine : 0,005