Milieux de culture Suppléments

Le supplément bouillon Fraser est utilisé avec la base bouillon Fraser dans l’enrichissement sélectif et la détection de Listeria.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La différenciation de Listeria des autres bactéries est facilitée en incluant le citrate d’ammonium ferrique (Difco™ Fraser Broth supplement) dans le milieu final. Puisque toutes les espèces de Listeria hydrolysent l’esculine, l’ajout d’ions ferriques dans le milieu détectera la réaction. Un noircissement du milieu par les cultures contenant des hydrolysats bactériens est le résultat de la formation de la 6,7-dihydroxycoumarine (esculétine) qui réagit avec les ions ferriques.

REACTIFS

Formule approximative pour 10mL
Citrate d’ammonium ferrique : 0,5g

Supplément sélectif pour bouillon Fraser demi, pour l'enrichissement des Listeria.

Préparation:

- Reconstituer le supplément lyophilisé sélectif pour Fraser ½ Qsp 500 mL (BS030) avec 5 mL d’une solution 1:1 éthanol / eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter 2,25 mL de supplément reconstitué BS030 dans chaque flacon de 225 mL de bouillon.
- Homogénéiser parfaitement

Composition:

- Acide nalidixique : 5,00 mg
- Acriflavine (chlorhydrate) : 6,25 mg
- Citrate de fer (III) ammoniacal : 0,25 g

Supplément sélectif pour le dénombrement des Entérocoques dans les eaux

Le supplément TTC 50 mg est un indicateur de la croissance bactérienne. Il est utilisé avec la gélose de Slanetz et Bartley (base) ou la gélose KF (base), pour le dénombrement des entérocoques dans les eaux d'alimentation, les boissons, les eaux usées et divers produits biologiques; aussi bien par la technique de filtration sur membranes que par la méthode classique de numération en boîtes de Petri. 

Préparation:

- Reprendre le lyophilisat en y ajoutant aseptiquement 5 mL d'eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter 1 mL de supplément réhydraté à 100 mL de gélose portée à ébullition et maintenue à 44-47 °C.

Composition:

- Triphényltétrazolium (chlorure) : 50,0 mg

La gélose PALCAM est un milieu sélectif utilisé pour la différenciation et l’isolement de Listeria monocytogenes et des autres Listeria dans les produits alimentaires tels que le lait et les fromages, ainsi que dans les autres denrées alimentaires même fortement contaminées.
Le milieu peut être utilisé comme second milieu au choix dans le cadre de la méthode de recherche de Listeria monocytogenes en microbiologie des aliments (NF EN ISO 11290-1).
La gélose PALCAM peut également être utilisée comme test de confirmation de Listeria spp dans la méthode COMPASS Listeria.

Le supplément selectif sous forme liquide pour milieu la selectif des Salmonelles . Il est utilisé dans la complémentation du milieu IRIS Compass salmonella Agar (770.007008.00).

IRIS Salmonella® est certifiée NF VALIDATION, selon le protocole de validation NF EN ISO 16140-2 de 2016 pour tous produits d’alimentation humaine et animale, ainsi que les échantillons de l’environnement de production industrielle.

Composition en gramme par litre

- Système séléctif: 2.0g

- Colorant 0.1g

Le Tergitol 7 agar  est utilisé pour la recherche et le dénombrement des Coliformes sur membrane.
milieu de base: TTC TERGITOL 7 ref: 250.033981.54
Préparation :
Dissoudre 51,10 g/l
Autoclaver 15 minutes à 115 °C
Après refroidissement à 45/50 °C, ajouter :
1 ml/100 ml d’une solution stérile de TTC à 0,05%
 

Composition en g/L.
Peptone de viande : 10,0
Extrait de levure : 6,0
Extrait de viande : 5,0
Lactose : 20,0
Bleu de bromothymol : 0,05
Tergitol 7 : 0,1
Agar agar : 12,7
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Ensemencement :
Ensemencer par étalement en surface ou en disposant une membrane
Incuber pendant 21 h ± 3 heures à 36 °C ± 2 °C

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu d'Oxford agar.

A 500 ml d'Oxford agar, ajouter stérilement le contenu d'un flacon de supplément SR 140 reconstitué avec 5 ml d'éthanol/eau distillée stérile à parties égales.

Composition :
Cycloheximide : 0,200
Colistine (sulfate) : 0,010
Acriflavine : 0,0025
Cefotetan : 0,001
Fosfomycine : 0,005

Supplément d’enrichissement pour gélose COMPASS Listeria, pour la détection des  Listeria spp. et Listeria monocytogenes.

Préparation:

- Au moment de l’utilisation du milieu complet, ajouter 3 mL de supplément d’enrichissement (BS070) ramené à température ambiante.
- Homogénéiser et couler en boîtes.

Le supplément selectif sous forme liquide pour milieu la culture de bacillus Cereus . Il est utilisé dans la complémentation du milieu Compass Bacillus Plus Agar (770.013008.02).

Ce supplément est certifié NF EN ISO 7218 permettant ainsi de reduire le temps d'incubation à 21h.

Gélose CFC pour le dénombrement des Pseudomonas

La gélose CFC est un milieu sélectif destiné au dénombrement de Pseudomonas spp, contaminant fréquemment rencontré dans les viandes et volailles au cours de leur conservation par réfrigération. 
La formule-type répond à la composition définie dans la norme NF EN ISO 13720, pour le dénombrement des Pseudomonas présomptifs dans les viandes et produits à base de viande.

Préparation:

- Réhydrater le supplément lyophilisé CFC avec 5 mL d’eau stérile.
- Agiter ou vortexer le flacon de façon à obtenir une dissolution complète, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter stérilement 1 mL de supplément dans chaque flacon de 100 mL de milieu.
- Couler en boîtes de Petri stériles.
- Laisser solidifier sur une surface froide.

Composition:

- Cétrimide : 5,0 mg
- Fusidate de sodium : 5,0 mg
- Céphalotine : 25,0 mg