Milieux de culture Suppléments

Le supplément bouillon Fraser est utilisé avec la base bouillon Fraser dans l’enrichissement sélectif et la détection de Listeria.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La différenciation de Listeria des autres bactéries est facilitée en incluant le citrate d’ammonium ferrique (Difco™ Fraser Broth supplement) dans le milieu final. Puisque toutes les espèces de Listeria hydrolysent l’esculine, l’ajout d’ions ferriques dans le milieu détectera la réaction. Un noircissement du milieu par les cultures contenant des hydrolysats bactériens est le résultat de la formation de la 6,7-dihydroxycoumarine (esculétine) qui réagit avec les ions ferriques.

REACTIFS

Formule approximative pour 10mL
Citrate d’ammonium ferrique : 0,5g

La gélose sélective pour Bacillus cereus selon Mossel est utilisée pour la détection et le dénombrement des spores et formes végétatives de Bacillus cereus dans les produits alimentaires.

PREPARATION

• Mettre en suspension 44,5 g de milieu déshydraté (250.033969.54) dans 0,9 litre d’eau distillée ou déminéralisée.

• Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution complète.

• Répartir en flacons à raison de 90 mL.

• Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes.

• Refroidir et maintenir à 44-47 °C.

• Dans chaque flacon de 90 mL de milieu de base, ajouter stérilement 10 mL d’émulsion stérile de jaune d’œuf avec Polymyxine B (BS055).

• Homogénéiser parfaitement.

• Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide. NOTE : A la place de 10 mL d’émulsion stérile de jaune d’œuf à la polymyxine, il est possible d’ajouter 10 mL d’émulsion de jaune d’œuf (770.006608.02) et 1 mL de supplément polymyxine (supplément 77000070802 réhydraté avec 5 mL d’eau stérile)

Sérum fœtal bovin. Origine Nouvelle-Zélande, Inactivé par la chaleur, filtré stérile, convient à la culture cellulaire, convient aux hybridomes.

Le FBS dérivé du sang coagulé est le supplément indéfini le plus utilisé dans la culture de cellules eucaryotes, en particulier de mammifères. Il est généralement utilisé avec les milieux classiques qui ont été développés dans les années 1950 et 1960. Ceux-ci comprennent de nombreux médias populaires tels que Minimum Essential Medium (MEM) ; Dulbecco′s Modified Eagles Media (DME, DMEM) ; Iscove′s Modified Eagles Medium (IMDM) ; M199 et Roswell Park Memorial Institute medium, RPMI-1640.

Du sérum bovin fœtal a été utilisé dans le milieu Dulbecco′s Modified Eagle Medium (DMEM) pour la génération de lignées cellulaires primaires.

NBB-PCR BOUILLON 9 FLACONS X 250ML

Application
Pour la détection des bactéries altérant la bière par PCR

Ingrédients
eau, bière, sucre, peptone, extrait de levure, facteurs de croissance, tampon, inhibiteurs.

Impropre à la consommation.
Valeur pH : 5,7 (5,5 - 5,9)

Supplément sélectif Novobiocine pour l'isolement des Salmonelles et d'Escherichia coli O157

La novobiocine est utilisée comme supplément sélectif dans plusieurs applications :
- Dans le bouillon Muller Kauffmann, le bouillon MKTTn et la gélose MSRV pour l'isolement sélectif des salmonelles mobiles.
- Et dans le bouillon d’enrichissement caséine-soja modifié (mTSB) pour la recherche des Escherichia coli O157. 

Préparation:

- Reprendre le lyophilisat en y ajoutant aseptiquement 5 mL d'eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.

Composition:

- Novobiocine : 10,0 mg

La gélose PALCAM est un milieu sélectif utilisé pour la différenciation et l’isolement de Listeria monocytogenes et des autres Listeria dans les produits alimentaires tels que le lait et les fromages, ainsi que dans les autres denrées alimentaires même fortement contaminées.
Le milieu peut être utilisé comme second milieu au choix dans le cadre de la méthode de recherche de Listeria monocytogenes en microbiologie des aliments (NF EN ISO 11290-1).
La gélose PALCAM peut également être utilisée comme test de confirmation de Listeria spp dans la méthode COMPASS Listeria.

Le Tergitol 7 agar  est utilisé pour la recherche et le dénombrement des Coliformes sur membrane.
milieu de base: TTC TERGITOL 7 ref: 250.033981.54
Préparation :
Dissoudre 51,10 g/l
Autoclaver 15 minutes à 115 °C
Après refroidissement à 45/50 °C, ajouter :
1 ml/100 ml d’une solution stérile de TTC à 0,05%
 

Composition en g/L.
Peptone de viande : 10,0
Extrait de levure : 6,0
Extrait de viande : 5,0
Lactose : 20,0
Bleu de bromothymol : 0,05
Tergitol 7 : 0,1
Agar agar : 12,7
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Ensemencement :
Ensemencer par étalement en surface ou en disposant une membrane
Incuber pendant 21 h ± 3 heures à 36 °C ± 2 °C

C'est une émulsion stabilisée stérile de plasma de lapin contenant du fibrinogène à utiliser dans la base d'agar de Baird Barker RPF. (réf.
55015010054,). Le milieu complet répond aux normes de microbiologie des aliments NF EN ISO 6888-2, NF EN ISO 6888-3 et NF V08-057-1. Elle répond aussi à la norme NF T90-412 utilisée pour le contrôle des eaux. 

Principe : Le milieu contient 3 inhibiteurs de flore secondaire, le chlorure de lithium, le tellurite de potassium ainsi qu'une la concentration importante en glycine. Les staphylocoques à coagulase positive sont caractérisés sur gélose RPF par la formation de colonies grises ou noires entourées d'un halo opaque de fibrine net, stable et bien visible.

Préparation:

Ajouter 10ml d'eau stérile. Agitez jusqu'à complète dissolution.

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu d'Oxford agar.

A 500 ml d'Oxford agar, ajouter stérilement le contenu d'un flacon de supplément SR 140 reconstitué avec 5 ml d'éthanol/eau distillée stérile à parties égales.

Composition :
Cycloheximide : 0,200
Colistine (sulfate) : 0,010
Acriflavine : 0,0025
Cefotetan : 0,001
Fosfomycine : 0,005

Supplément sélectif lyophilisé pour gélose COMPASS Listeria, pour la détection des  Listeria spp. et Listeria monocytogenes.

Préparation:

- Reprendre le lyophilisat du supplément sélectif (BS071) en y ajoutant aseptiquement 10 mL d’eau distillée stérile.
- Ajouter stérilement 1 mL de supplément pour 100 mL de base et homogénéiser.
- Au moment de l’utilisation du milieu complet, ajouter 3 mL de supplément d’enrichissement (BS070) ramené à température ambiante.
- Homogénéiser et couler en boîtes.