Milieux de culture

La gélose Mueller Hinton II (Mueller Hinton II Agar) est utilisée dans la méthode standardisée de test par diffusion sur disque pour déterminer la sensibilité des isolats cliniques des organismes aérobies à croissance rapide vis-à-vis des agents antimicrobiens.

La méthode Bauer-Kirby consiste à diffuser au travers d’une gélose des substances antimicrobiennes imprégnées sur des disques de papier. Des méthodes plus anciennes, qui faisaient appel à des disques aux concentrations antimicrobiennes faibles et élevées, fondaient l’interprétation des résultats sur la présence ou l’absence de zones d’inhibition. Aujourd’hui, ce procédé s’appuie sur des disques à concentration constante d’agents antimicrobiens et les diamètres des zones sont comparés aux concentrations minimales d’inhibition (CMI). Dans le mode opératoire du test, une suspension standardisée de l’organisme est écouvillonnée sur toute la surface du milieu. Des disques de papier imprégnés d’une quantité déterminée d’antibiotique ou d’autres agents antimicrobiens sont alors placés contre la surface du milieu. La boîte de Pétri est incubée, puis les zones d’inhibition qui apparaissent autour de chaque disque sont mesurées. La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S), intermédiaire (I) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux 2A à 2D figurant dans le document CLSI M100 (M2). La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux des concentrations critiques fixées par l'EUCAST. Divers facteurs ont été identifiés comme influençant les tests de sensibilité par diffusion sur disque. Ce sont notamment le milieu et l’excès d’humidité à sa surface, la profondeur de la gélose, l’activité des disques, la concentration de l’inoculum, le pH et la production de ß-lactamase par les microorganismes testés.

La Mueller Hinton Agar est un milieu standard utilisé lors des tests de sensibilité des aérobies à croissance rapide ou des organismes bactériens anaérobies facultatifs, par exemple les staphylocoques, les entérocoques, la famille des Enterobacteriaceae et les bâtonnets aérobies Gram-négatifs (ex. les espèces de Pseudomonas). Les documents de référence pour l'interprétation de la sensibilité sont mis à jour tous les ans. La version la plus récente doit être consultée afin d'interpréter correctement les résultats obtenus. Diverses méthodes ainsi que d'autres milieux et conditions ont été développés pour les espèces exigeantes, par exemple les espèces Haemophilus spp., Neisseria spp. et Streptococcus pneumoniae et les streptocoques.

Trypticase™ Soy Agar (TSA) ou gélose trypticase au soja est utilisée pour l'isolement et la culture de microorganismes exigeants ou non. 

C'est une émulsion stabilisée stérile de plasma de lapin contenant du fibrinogène à utiliser dans la base d'agar de Baird Barker RPF. (réf.
55015010054,). Le milieu complet répond aux normes de microbiologie des aliments NF EN ISO 6888-2, NF EN ISO 6888-3 et NF V08-057-1. Elle répond aussi à la norme NF T90-412 utilisée pour le contrôle des eaux. 

Principe : Le milieu contient 3 inhibiteurs de flore secondaire, le chlorure de lithium, le tellurite de potassium ainsi qu'une la concentration importante en glycine. Les staphylocoques à coagulase positive sont caractérisés sur gélose RPF par la formation de colonies grises ou noires entourées d'un halo opaque de fibrine net, stable et bien visible.

Préparation:

Ajouter 10ml d'eau stérile. Agitez jusqu'à complète dissolution.

Gélose exempte de sucres pour la numération des germes contaminants dans le beurre selon recommandation de la FIL (norme JO de 1964).

Préparation :
Dissoudre 35 g/l. Autoclaver 15 minutes à 120 °C.
Incubation 48 h à 30 °C puis 48 h à 20 °C.

Composition :
Peptone de gélatine : 7,5
Peptone de caséine : 7,5
Chlorure de sodium : 5,0
Agar agar : 15,0
pH 7,5 ± 0,1

Gélose VFSR avec 2 g/L d'extrait de levure, pour le dénombrement des spores de bactéries anaérobies sulfito-réducteurs.

La gélose glucosée viande-foie pour sulfito-réducteurs (VFSR) avec 2 g/L d’extrait de levure est utilisée pour le dénombrement des spores de bactéries anaérobies sulfito-réducteurs dans les matières premières et ingrédients entrant dans la composition des conserves non acides (pH>4,5), ainsi que les prélèvements de surface et dans les eaux de process des conserveries. 
Elle peut être utilisée aussi pour le dénombrement des spores dans les produits pasteurisés.

Préparation :

- En conserverie, chauffer le produit à analyser 10 minutes à 95-100 °C.
- Pour les produits pasteurisés, chauffer 10 min à 80 ± 2 °C pour la recherche de Bacillus cereus et des anaérobies sulfito-réducteurs ; 10 min à 75 ± 2 °C pour la recherche des Clostridium butyriques ; 10 min à 95-100 °C pour la recherche des Bacillus et Clostridium thermophiles.
- Faire fondre le milieu prêt-à-liquéfier (BM169) pendant le minimum de temps nécessaire à sa reliquéfaction totale.
- Refroidir et maintenir à 44-47°C.
- Transférer 1 mL de la suspension traitée thermiquement et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes de Petri stériles.
- Couler environ 15 mL de milieu, par boîte.
- Homogénéiser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide.
- Ajouter une couche de 5 à 10 mL du même milieu de manière à former une deuxième couche et laisser solidifier.
- Incuber dans les jarres pour anaérobiose : à 37 ± 1 °C pendant 48 ± 3 heures, pour les bactéries anaérobies mésophiles.
ou à 55 ± 1 °C pendant 5 jours, pour les bactéries anaérobies thermophiles, en prenant soin de couler dans le couvercle des boîtes quelques gouttes d’huile de paraffine stérile pour assurer l’étanchéité. 

Composition:

Pour 1 litre de milieu :
- Peptone viande-foie : 30,0 g
- Glucose : 2,0 g
- Extrait de levure : 2,0 g
- Amidon soluble : 2,0 g
- Sulfite de sodium : 2,5 g
- Citrate de fer ammoniacal : 0,5 g
- Agar agar bactériologique : 12,0 g

pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25 °C : 7,6 ± 0,2.  

GIOLITTI CANTONI BOUILLON BASE TWEEN 80 BK159HA-500G

Le bouillon de Giolitti et Cantoni est un bouillon d’enrichissement sélectif pour la mise en évidence de Staphylocoques coagulase positifs dans les denrées alimentaires.

Complément : potassium tellurite.

Dissoudre 55,2 g/l. Autoclaver 20 minutes à 115 °C. Ajouter 0,1 ml d’une solution aqueuse de tellurite de potassium à 1% (préalablement stérilisée par filtration) par tube de 19 ml. Incubation 24 à 48 h à 37 °C.

Composition :
Tryptone : 10,0
Extrait de levure : 5,0
Extrait de viande : 5,0
Glycine : 1,2
Chlorure de sodium : 5,0
Chlorure de lithium : 5,0
D (-) Mannitol : 20,0
Pyruvate de sodium : 3,0
Tween 80 : 1,0
pH final 6,9 ± 0,2 à 25 °C

Pour la détection des bactéries coliformes à 35°C et d'Escherichia coli à une température élevée.

Les géloses BCYE avec cystéine et BCYE sans cystéine sont utilisées pour la confirmation des colonies présomptives de Legionella spp. dans les échantillons d’eau et les autres prélèvements susceptibles d’en contenir.

La gélose BCYE avec cystéine peut également être utilisée pour le dénombrement des Legionella spp. dans les échantillons d’eau.

La formule-type des géloses répond à la composition définie dans les normes pour le contrôle des eaux NF EN ISO 11731 et NF T 90-431.

Difco™ Gélose Rogosa SL

Cette gélose aussi connue sous le nom de RMW Agar, est une modification des milieux décrits par Rogosa, Mitchell et Wiseman. Elle est utilisée pour l’isolement, le dénombrement et l’identification des lactobacilles dans la bactériologie orale, les matières fécales, les échantillons vaginaux et les denrées alimentaires. Le pH bas et les concentrations élevées d’acétate suppriment efficacement les autres flores bactériennes permettant aisni aux lactobacilles de se développer.

Composition (pour 1L de préparation):

Tryptone.................................................................... 10.0 g
Extrait de levures................................................................ 5.0 g
Dextrose.................................................................... 10.0 g
Arabinose.................................................................... 5.0 g
Saccharose................................................................... 5.0 g
Acetate de sodium......................................................... 15.0 g
Citrate d'ammonium...................................................... 2.0 g
Phosphate monopotassique.......................................... 6.0 g
Sulfate de magnésium...................................................... 0.57 g
Sulfate de manganèse...................................................... 0.12 g
Sulfate de fer............................................................. 0.03 g
Polysorbate 80............................................................. 1.0 g
Agar.......................................................................... 15.0 g

Complément pour Legiolert avec bandelettes tests de la dureté de l'eau.

Ce kit de supplément Legiolert est à utiliser pour le test d'échantillons d'eau potable.