La gélose Mueller Hinton II (Mueller Hinton II Agar) est utilisée dans la méthode standardisée de test par diffusion sur disque pour déterminer la sensibilité des isolats cliniques des organismes aérobies à croissance rapide vis-à-vis des agents antimicrobiens.

La méthode Bauer-Kirby consiste à diffuser au travers d’une gélose des substances antimicrobiennes imprégnées sur des disques de papier. Des méthodes plus anciennes, qui faisaient appel à des disques aux concentrations antimicrobiennes faibles et élevées, fondaient l’interprétation des résultats sur la présence ou l’absence de zones d’inhibition. Aujourd’hui, ce procédé s’appuie sur des disques à concentration constante d’agents antimicrobiens et les diamètres des zones sont comparés aux concentrations minimales d’inhibition (CMI). Dans le mode opératoire du test, une suspension standardisée de l’organisme est écouvillonnée sur toute la surface du milieu. Des disques de papier imprégnés d’une quantité déterminée d’antibiotique ou d’autres agents antimicrobiens sont alors placés contre la surface du milieu. La boîte de Pétri est incubée, puis les zones d’inhibition qui apparaissent autour de chaque disque sont mesurées. La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S), intermédiaire (I) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux 2A à 2D figurant dans le document CLSI M100 (M2). La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux des concentrations critiques fixées par l'EUCAST. Divers facteurs ont été identifiés comme influençant les tests de sensibilité par diffusion sur disque. Ce sont notamment le milieu et l’excès d’humidité à sa surface, la profondeur de la gélose, l’activité des disques, la concentration de l’inoculum, le pH et la production de ß-lactamase par les microorganismes testés.

La Mueller Hinton Agar est un milieu standard utilisé lors des tests de sensibilité des aérobies à croissance rapide ou des organismes bactériens anaérobies facultatifs, par exemple les staphylocoques, les entérocoques, la famille des Enterobacteriaceae et les bâtonnets aérobies Gram-négatifs (ex. les espèces de Pseudomonas). Les documents de référence pour l'interprétation de la sensibilité sont mis à jour tous les ans. La version la plus récente doit être consultée afin d'interpréter correctement les résultats obtenus. Diverses méthodes ainsi que d'autres milieux et conditions ont été développés pour les espèces exigeantes, par exemple les espèces Haemophilus spp., Neisseria spp. et Streptococcus pneumoniae et les streptocoques.

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