Milieux de culture Déshydratés

Le milieu Rappaport-Vassiliadis semi-solide (MSRV semi-solide) de Difco™ est utilisé avec le supplément antibiotique Novobiocine dans la détection rapide de Salmonella motile dans les fèces et les produits alimentaires.

Le milieu MSRV semi-solide est une modification du bouillon d’enrichissement Rappaport-Vassiliadis pour la détection des Salmonella motiles dans les fèces et les produits alimentaires. Le travail original sur le milieu MSRV montrait que le milieu semi-solide sur boite de pétri pouvait être utilisé comme un moyen rapide et sensible de l’isolement de Salmonella motile à parti de produits alimentaires à la suite d’un pré-enrichissement ou d’un enrichissement sélectif. Le milieu semi-solide permet la détection de la motilité par des halos de croissance autour du point d’origine de l’inoculation.

Le milieu MSRV semi-solide peut être utilisé comme milieu en boîte pour isoler Salmonella spp. (autre que Salmonella Typhi ou Salmonella Paratyphi A) à partir de prélèvement de selle avec une haute sensibilité et spécificité.

Bouillon d'enrichissement Listeria Difco ™

Le bouillon d'enrichissement Listeria est utilisé pour enrichir sélectivement Listeria des aliments.

La gélose Mueller Hinton II (Mueller Hinton II Agar) est utilisée dans la méthode standardisée de test par diffusion sur disque pour déterminer la sensibilité des isolats cliniques des organismes aérobies à croissance rapide vis-à-vis des agents antimicrobiens.

La méthode Bauer-Kirby consiste à diffuser au travers d’une gélose des substances antimicrobiennes imprégnées sur des disques de papier. Des méthodes plus anciennes, qui faisaient appel à des disques aux concentrations antimicrobiennes faibles et élevées, fondaient l’interprétation des résultats sur la présence ou l’absence de zones d’inhibition. Aujourd’hui, ce procédé s’appuie sur des disques à concentration constante d’agents antimicrobiens et les diamètres des zones sont comparés aux concentrations minimales d’inhibition (CMI). Dans le mode opératoire du test, une suspension standardisée de l’organisme est écouvillonnée sur toute la surface du milieu. Des disques de papier imprégnés d’une quantité déterminée d’antibiotique ou d’autres agents antimicrobiens sont alors placés contre la surface du milieu. La boîte de Pétri est incubée, puis les zones d’inhibition qui apparaissent autour de chaque disque sont mesurées. La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S), intermédiaire (I) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux 2A à 2D figurant dans le document CLSI M100 (M2). La réaction de l'organisme est déterminée comme sensible (S) ou résistante (R) à un agent en comparant les diamètres des zones observées à ceux répertoriés dans les tableaux des concentrations critiques fixées par l'EUCAST. Divers facteurs ont été identifiés comme influençant les tests de sensibilité par diffusion sur disque. Ce sont notamment le milieu et l’excès d’humidité à sa surface, la profondeur de la gélose, l’activité des disques, la concentration de l’inoculum, le pH et la production de ß-lactamase par les microorganismes testés.

La Mueller Hinton Agar est un milieu standard utilisé lors des tests de sensibilité des aérobies à croissance rapide ou des organismes bactériens anaérobies facultatifs, par exemple les staphylocoques, les entérocoques, la famille des Enterobacteriaceae et les bâtonnets aérobies Gram-négatifs (ex. les espèces de Pseudomonas). Les documents de référence pour l'interprétation de la sensibilité sont mis à jour tous les ans. La version la plus récente doit être consultée afin d'interpréter correctement les résultats obtenus. Diverses méthodes ainsi que d'autres milieux et conditions ont été développés pour les espèces exigeantes, par exemple les espèces Haemophilus spp., Neisseria spp. et Streptococcus pneumoniae et les streptocoques.

Trypticase™ Soy Agar (TSA) ou gélose trypticase au soja est utilisée pour l'isolement et la culture de microorganismes exigeants ou non. 

Pour l'isolement et la détection de Pseudomonas spp.

P.aeruginosa est un indicateur valable pour le contrôle de l'efficacité des traitements de désinfection de l'eau. Ce paramètre est actuellement utilisé comme critère dans la régulation des pataugeoires et piscines. En plus de son rôle d'indicateur de propreté, P aeruginosa est également recherché comme pathogène opportuniste dont la transmission est souvent associée à l'eau.
CHROMagar™ Pseudomonas fournit des résultats rapides et clairs pour la détection de Pseudomonas grâce à des couleurs de colonies différentielles. 

Lecture :

• Pseudomonas dont P.aeruginosa
  • Bleu-vert
• Autres microorganismes tels que S.saprophyticus, E.coli, P.mirabilis
  • Sans couleur ou inhibé

La gélose à l'urée et le bouillon de test à l'uréase sont utilisés pour la différenciation des organismes, en particulier les entérobactéries, sur la base de la production d'uréase.

Gélose exempte de sucres pour la numération des germes contaminants dans le beurre selon recommandation de la FIL (norme JO de 1964).

Préparation :
Dissoudre 35 g/l. Autoclaver 15 minutes à 120 °C.
Incubation 48 h à 30 °C puis 48 h à 20 °C.

Composition :
Peptone de gélatine : 7,5
Peptone de caséine : 7,5
Chlorure de sodium : 5,0
Agar agar : 15,0
pH 7,5 ± 0,1

GIOLITTI CANTONI BOUILLON BASE TWEEN 80 BK159HA-500G

Le bouillon de Giolitti et Cantoni est un bouillon d’enrichissement sélectif pour la mise en évidence de Staphylocoques coagulase positifs dans les denrées alimentaires.

Complément : potassium tellurite.

Dissoudre 55,2 g/l. Autoclaver 20 minutes à 115 °C. Ajouter 0,1 ml d’une solution aqueuse de tellurite de potassium à 1% (préalablement stérilisée par filtration) par tube de 19 ml. Incubation 24 à 48 h à 37 °C.

Composition :
Tryptone : 10,0
Extrait de levure : 5,0
Extrait de viande : 5,0
Glycine : 1,2
Chlorure de sodium : 5,0
Chlorure de lithium : 5,0
D (-) Mannitol : 20,0
Pyruvate de sodium : 3,0
Tween 80 : 1,0
pH final 6,9 ± 0,2 à 25 °C

Le Malt agar est une gélose à l’extrait de malt pour la recherche des Levures et Moisissures.

Complément : acide lactique.

Dissoudre 48 g/l, ajuster le pH à 4,5 par addition d’une solution stérile d’acide lactique à 10%. Incubation 3/5 jours à 20/25 °C à la lumière.

Composition du Malt agar :
Extrait de malt : 30,0
Peptone de farine de soja : 3,0
Agar agar : 15,0
pH final 5,5 ± 0,2 à 25 °C

Le bouillon M-Green levure et moisissure est utilisé pour la détection des champignons en analyse de routine des boissons.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La formulation est riche en nutriments fournis par les peptones, l’extrait de levure et le dextrose, mais la croissance bactérienne est inhibée par un pH acide. La diastase est un mélange amylolytique d’enzymes (hydrolyse d’amidon). L’indicateur vert de bromocrésol facilite la visualisation et le comptage des colonies fongiques. Les colonies sont vertes, ce qui est dû à la diffusion du vert de bromocrésol dans les colonies (réaction alcaline). Les produits finis des colonies diffusent  dans le milieu, réduisant encore le pH et provoquant un virage du colorant au jaune (réaction acide).

RESULTATS ATTENDUS

Après incubation, les colonies apparaissant à la surface du filtre peuvent être comptées. Les colonies de moisissures apparaissent généralement vertes et filamenteuses alors que les colonies de levures sont vertes et opaques.