Milieux de culture

Bouillon de MacCONKEY.

Milieu de culture sélectif utilisé comme test présomptif pour les bactéries E. coli et coliformes et pour déterminer le titre en E. coli ou coliformes du lait, de l'eau et d'autres matières selon MacCONKEY et HILL (1901).

Supplément sélectif pour bouillon Fraser Merck.

Gélose Mueller Hinton BIOKAR - 500G

La gélose de Mueller Hinton est reconnue par tous les experts comme étant le milieu de référence pour l’étude de la sensibilité des germes aux antibiotiques et aux sulfamides. Elle constitue un excellent milieu de base pour la fabrication de géloses au sang.

Composition : 
Pour 1L de milieu.

Hydrolysat acide de caséine : 17,5 g
Extrait de viande : 2,0 g
Amidon soluble : 1,5 g
Agar agar bactériologique : 17,0 g
pH final à 25°C : 7,3 ± 0,2

Préparation :

1. Mettre en suspension 38,0 g de milieu déshydraté dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée.
2. Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution complète.
3. Répartir en tubes ou en flacons.
4. Stériliser à l’autoclave à 115 °C pendant 15 minutes.
5. Refroidir et maintenir le milieu à 44-47 °C.
6. Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.
7. L’épaisseur de la gélose doit être impérativement de 4 mm.
8. Laisser solidifier sur une surface froide.
9. Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert de façon à éviter la formation de gouttelettes d’eau à la surface de la gélose, phénomène pouvant altérer les qualités de diffusabilité du milieu. 

Normes : NF U47-106, NF EN ISO 10272-1, XP CEN ISO/TS 10272-3, NF U47-107.

LB Miller Gelose BD 244520-500G

La gélose LB, Miller est utilisée pour le maintien et le développement d'Escherichia coli en procédures de microbiologie moléculaire.

Ce milieu LB Miller est  riche en nutriments et est adapté pour la croissance des souches recombinantes. E. coli se développe plus rapidement car ils fournissent aux bactéries des acides aminés, des précurseurs de nucléotides, vitamines et autres métabolites que le micro-organisme devrait autrement synthétiser.

Les Apports du milieu LB Miller :
- Les peptones fournissent l'azote et le carbone.
- L'extrait de levure apporte la source de vitamine et d'oligo-élements
- Le chlorure de sodium apporte ions Na et ainsi l'équilibre osmotique
- L'agar est l'agent solidifiant

Composition du milieu LB Miller pour 1 litre:
- Tryptone : 10g
- Extrait de levure : 5g
- Chlorure de soduim : 10g
- Agar : 15g

Ringer est un liquide de dilution très employé en bactériologie alimentaire.

Dissoudre 1 comprimé dans 500 ml d’eau distillée pour obtenir la solution de Ringer au 1/4. Autoclaver 15 minutes à 120 °C.

Composition :
Chlorure de sodium : 2,25
Chlorure de potassium : 0,105
Chlorure de calcium : 0,12
Bicarbonate de sodium : 0,05
pH final 7,0

Gélose Wilkins-Chalgren BIOKAR - 500G

La gélose de Wilkins-Chalgren est utilisée pour déterminer les concentrations minimales inhibitrices d’antibiotiques pour les bactéries anaérobies, par la technique en dilution. Elle permet également la culture abondante et l’isolement des germes anaérobies.

Composition : 
Pour 1L de milieu.

Tryptone : 10,0 g
Peptone pancréatique de gélatine : 10,0 g
Extrait autolytique de levure : 5,0 g
L-arginine : 1,0 g
Glucose : 1,0 g
Hémine : 5,0 mg
Vitamine K1 : 0,5 mg
Pyruvate de sodium : 1,0 g
Chlorure de sodium : 5,0 g
Agar agar bactériologique : 15,0 g
pH final à 25°C : 7,1 ± 0,2

Préparation :

1. Mettre en suspension 48,0 g de milieu déshydraté dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée.
2. Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution.
3. Répartir en tubes ou en flacons.
4. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes.
5. Refroidir et maintenir le milieu à 44-47 °C.
6. Si besoin, ajouter les antibiotiques à tester.
7. Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.

La méthode COMPASS® Listeria est une méthode alternative rapide de recherche de Listeria monocytogenes et de Listeria spp, dans les produits d’alimentation humaine et échantillons de l’environnement. Apres une premiere étape d’enrichissement sélectif en bouillon Fraser ½, une seconde etape de repiquage sur COMPASS® Listeria Agar. L’enrichissement peut être réalisé à 37°C pendant 18 à 24 heures, ou à 30°C pendant 22 à 28 heures. 

La méthode est certifiée NF VALIDATION, selon le protocole de validation NF EN ISO 16140-2 de 2016 pour tous produits d’alimentation humaine et les échantillons de l’environnement de production industrielle. 

Le SPS agar est utilisé pour l’isolement et la numération de Clostridium perfringens et Clostridium botulinum dans les denrées alimentaires.

Préparation :
Dissoudre 40 g/l . Autoclaver 15 minutes à 120 °C.
Incubation 24 à 48 h à 37 °C ou 46 °C en anaérobiose.

Composition :
Peptone de caséine : 15,0
Extrait de levure : 10,0
Citrate ferrique : 0,5
Sulfite de sodium : 0,5
Sulfate de polymyxine B : 0,01
Sulfadiazine sodique : 0,12
Agar agar : 13,9
pH final 7,0 ± 0,2 à 25 °C

Le milieux Rappaport-Vassiliadis semi-solide modifié (MSRV) est utilisé avec de la novobiocine pour l’enrichissement sélectif des Salmonella mobiles dans les échantillons fécaux d’origine animale et les échantillons environnementaux.

Le milieux répond aux spécifications de formulations et de performance recommandées par l’ISO 6579 : amendement 1.

PREPARATION

Suspendre 31,6g de poudre dans 1 litre d’eau désionisée ou distillée. Chauffer en agitant régulièrement et faire bouillir pendant 1 minute jusqu’à ce que la poudre soit complètement dissoute.
NE PAS AUTOCLAVER.
Refroidir à 45-50°C.
Ajouter aseptiquement le contenu de 2 flacons de supplément de novobiocine (ref : 550.081021.02) chacun reconstitués avec 5 mL d’eau distillée stérile.
Bien mélanger.
Verser dans les boîtes de pétri. 

Plate count agar est utilisé pour la numération des Germes banaux dans le lait et les produits laitiers.

Préparation:

Dissoudre 20,5 g/l. Autoclaver 15 minutes à 120 °C.

Incubation :
- 72 h à 20 °C pour les psychrophiles
- 72 h à 30 °C pour les mésophiles
- 72 h à 55 °C pour les thermophiles

Composition :
Peptone de caséine (Tryptone) : 5,0
Extrait de levure : 2,5
Glucose : 1,0
Agar agar : 12,0
pH final 7,0 ± 0,2 à 25 °C