Milieux de culture

Bouillon de soja BBL ™ Trypticase ™ (bouillon de soja et de caséine)

Tryptic (Trypticase) Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium) est un support à usage général utilisé dans les procédures qualitatives de culture de microorganismes exigeants ou non, à partir d'une variété d'échantillons cliniques et non cliniques.

La gélose au Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose (TCBS) constitue un milieu sélectif destiné à l’isolement de Vibrio cholerae et des autres vibrions entéropathogènes (en particulier Vibrio parahaemolyticus) dans les poissons, les produits de la mer et les autres prélèvements biologiques d’origine animale.

PREPARATION

- Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C.
- Couler en boîtes de Petri stériles.
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
- Ensemencer l’inoculum par étalement en surface.
- Incuber à 37°C pendant 18 à 24 heures, à l’abri de la lumière. 

COMPOSITION

Pour 1 litre de milieu

- Polypeptone : 10,0 g
- Extrait autolytique de levure : 5,0 g
- Saccharose : 20,0 g
- Bile de bœuf bactériologique : 5,0 g
- Cholate de sodium : 3,0 g
- Citrate de sodium : 10,0 g
- Thiosulfate de sodium : 10,0 g
- Chlorure de sodium : 10,0 g
- Citrate ferrique ammoniacal : 1,0 g
- Bleu de bromothymol : 40,0 mg
- Bleu de thymol : 40,0 mg
- Agar agar bactériologique : 14,0 g

pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 8,6 ± 0,2. 

La gélose CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) est utilisée pour l'isolement, la numération et la différenciation des microorganismes urinaires.

PREPARATION

Mettre en suspension 36,1 g de milieu déshydraté (BK020) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en tubes ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 115°C pendant 20 minutes.

COMPOSITION

Pour 1 litre de milieu

- Peptone pancréatique de gélatine : 4,0 g
- Tryptone : 4,0 g
- Extrait de viande : 3,0 g
- L-cystine : 128,0 mg
- Lactose : 10,0 g
- Bleu de bromothymol : 20,0 mg
- Agar agar bactériologique : 15,0 g

pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,3 ± 0,2. 

Supplément sélectif pour le dénombrement des Entérocoques dans les eaux

Le supplément TTC 50 mg est un indicateur de la croissance bactérienne. Il est utilisé avec la gélose de Slanetz et Bartley (base) ou la gélose KF (base), pour le dénombrement des entérocoques dans les eaux d'alimentation, les boissons, les eaux usées et divers produits biologiques; aussi bien par la technique de filtration sur membranes que par la méthode classique de numération en boîtes de Petri. 

Préparation:

- Reprendre le lyophilisat en y ajoutant aseptiquement 5 mL d'eau distillée stérile.
- Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution, tout en évitant la formation de mousse.
- Ajouter 1 mL de supplément réhydraté à 100 mL de gélose portée à ébullition et maintenue à 44-47 °C.

Composition:

- Triphényltétrazolium (chlorure) : 50,0 mg

Pour l'isolement et la différenciation des agents pathogènes des voies urinaires.

99,3% de Sensibilité pour E.coli.
L'objectif maljeur de ce milieu est la détection des agents pathogènes des voies urinaires comme E.coli (colonies rouges), Klebsiella (colonies bleues métalliques), P.mirabilis (colonies brunes avec halo), etc.
Toutefois CHROMagar™ Orientation a une application plus large en tant que gélose nutritive pour l'isolement des différents micro-organismes. Par exemple, CHROMagar™ Orientation peut être utilisé pour différencier les divers micro-organismes dans d'autres zones infectées, par exemple dans les cicatrices. 
CHROMagar™ Orientation est aussi utile lorsqu'il est complété par divers antibiotiques dans la détection des micro-organismes multi-résistants. 

Lecture :

• E.coli
  • Rose foncé à rougeâtre
• Klebsiella, Enterobacter, Serratia
  • Bleu métallique
• Citrobacter
  • Bleu métallique avec un halo rouge
• Proteus
  • Halo brun
• S.aureus
  • Doré, opaque, petit
• S.saprophyticus
  • Rose, opaque, petit
• Enterococcus
  • Bleu turquoise

Le bouillon caséine soja est utilisé pour la culture des micro-organismes les plus exigeants, pour les tests de stérilité et comme milieu d’enrichissement pour la recherche de Staphylocoques aureus.

Préparation:

Dissoudre 30 g/l. Autoclaver 15 minutes à 120 °C.

Composition :
Tryptone : 17,0
Peptone papaïnique de soja : 3,0
Glucose : 2,5
Phosphate dipotassique : 2,5
Chlorure de sodium : 5,0
pH final 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Les milieux décarboxylase sont utilisés dans la différenciation biochimique des bacilles entériques gram-négatifs basée sur la production d'arginine dihydrolase et de lysine et ornithine décarboxylase.

Le milieu de base de la décarboxylase, additionné d'arginine, de lysine ou d'ornithine, est utilisé dans le même but. 

Le bouillon de lysine décarboxylase est utilisé pour différencier les micro-organismes sur la base de la décarboxylation de la lysine.

La gélose PALCAM est un milieu sélectif utilisé pour la différenciation et l’isolement de Listeria monocytogenes et des autres Listeria dans les produits alimentaires tels que le lait et les fromages, ainsi que dans les autres denrées alimentaires même fortement contaminées.
Le milieu peut être utilisé comme second milieu au choix dans le cadre de la méthode de recherche de Listeria monocytogenes en microbiologie des aliments (NF EN ISO 11290-1).
La gélose PALCAM peut également être utilisée comme test de confirmation de Listeria spp dans la méthode COMPASS Listeria.

Agar Merck 1614 est une gélose exempte d’inhibiteur pour milieux de culture.

Préparation :12 g/l.

Bouillon d'enrichissement de Listeria modifié par UVM Difco™

Le bouillon d'enrichissement de Listeria modifié par UVM est utilisé pour isoler rapidement Listeria monocytogenes.