Milieux de culture

L'agar Brucella est un milieu de culture pour la culture des organismes Brucella. Avec l'ajout de 5% de sang de cheval, le milieu est utilisé dans les procédures qualitatives pour l'isolement et la culture de micro-organismes non fastidieux et exigeants à partir d'une variété d'échantillons cliniques et non cliniques. Le bouillon Brucella est utilisé pour la culture des espèces de Brucella et pour l'isolement et la culture d'une grande variété de micro-organismes fastidieux et non fastidieux.

La solution TTC 1% Difco™ (Triphenyltetrazolium Chloride) est prête à l’emploi pour la préparation de milieu de culture.

La solution TTC 1% est préparée à partir de 2,3,5 triphenyltetrazolium chloride destinée à la microbiologie. Elle est utilisée comme un indicateur redox dans les milieux de culture pour la différenciation bactérienne. Chapman a expliqué que l’ajout de TTC à la gélose Tergitol™ permettait la détection et la confirmation de E. coli après seulement 10 heures d’incubation. Chapman a aussi expliqué que la gélose Tergitol 7 avec ajout de TTC donnait un milieu sélectif pour la détection et l’isolement de Candida albicans. Chapman ajoutait du TTC, Tergitol 7 et du pourpre de bromocrésol à la gélose Sabouraud au Malt pour l’isolement et l’identification de C. calbicans et autre champignon. Pagao, Levin et Trejo incorporaient du TTC dans la base Pagano Levin pour la détection et l’isolement des espèces de Candida.

Slanetz et Bartley utilisaient le TTC dans la gélose m-Enterococcus pour l’énumération des entérocoques. Sur ce milieu les colonies apparaissent de couleur rose à marron foncé. Kenner, Clark et Kabler utilisaient le TTC avec la gélose KF Streptococcus et le bouillon pour détecter et énumérer les streptocoques à la surface de l’eau.

PRINCIPE DE LA PROCEDURE

La solution TTC 1% est utilisée comme un indicateur redox pour les milieux de culture pour la différenciation bactérienne. Elle est incolore dans sa forme oxydée et est réduite en triphénylformazan par des systèmes réducteurs. La formation du formazan est une réaction irréversible. Une fois que le microorganisme réduit l’indicateur, la couleur rouge persiste.

Eau Peptonée Tamponnée EP, USP

L'EAU PEPTONE TAMPON EP, USP est un fluide de dilution utilisé pour l'examen microbien de produits non stériles, tel que recommandé dans
les sections de tests des limites microbiennes harmonisés dans la Ph. EP et l'USP.

Malt Agar

L'extrait de malt fournit les nutriments nécessaires à la croissance des micro-organismes. L'agar est l'agent de solidification. Le pH acide de le milieu permet une croissance optimale des moisissures et des levures tout en limitant la croissance bactérienne.

Le bouillon de base TAT (avec ajout de polysorbate 20) est utilisé pour cultiver les microorganismes à partir de matériaux très visqueux ou gélatineux. 

Gélose Bile Esculin BBL™

La gélose à l'esculine biliaire est utilisée pour différencier les entérocoques et les
Groupe de streptocoques bovis provenant d'autres streptocoques.

Emulsion stérile de jaune d’œuf à la Polymyxine B pour gélose sélective pour le dénombrement de Bacillus cereus selon Mossel.

Préparation:

- Dans chaque flacon de 90 mL de milieu de base, ajouter stérilement 10 mL d’émulsion stérile de jaune d’œuf avec Polymyxine B (BS055).
- Homogénéiser parfaitement.
- Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.

Composition:

- Polymyxine B (sulfate) : 5x10^4 UI
- Emulsion stérile de jaune d’œuf : 50,0 mL

Pour la détection de Van A/Van B VRE faecalis et VRE. faecium.

Avec l'agar-agar classique (Bile Esculine Agar-agar complété avec vancomycin), il n'y a aucune differenciation entre E.faecalis/E.
Faecium des autres enterocoques, amenant souvent à de faux positifs provenant d'autre bactéries (comme Lactococcus, Pediococcus …) et à la production d'un rendu noir à la lecture, accentuant la difficulté de l'identification des couleurs des colonies.
CHROMagar™ VRE permet la distinction des  VRE.faecalis des VRE.faecium qui deviennent facilement distinguables par la couleur de la colonie.

Lecture : 

• VRE.faecalis/VRE.faecium
  • Rose à mauve
• E.gallinarum/E.casseliflavus
  • Bleu ou inhibé
• Autres bactéries
  • Inhibé

Le bouillon Fraser base est un bouillon de pré-enrichissement et d’enrichissement pour la recherche de Listeria dans les produits alimentaires.

Préparation du bouillon Fraser base Merck 10938 :
Dissoudre 57,4 g par litre d’eau déminéralisée. Autoclaver à 121 °C/15 min.
- pour le Fraser au demi : à 1 litre de bouillon base, refroidi à 50 °C, ajouter 2 flacons de mélange d'antibiotiques et 2 autres de citrate de fer ammoniacal.
- pour le Fraser complet : à 1 litre de bouillon base, ajouter 4 flacons de mélange d'antibiotiques et 2 autres de citrate de fer ammoniacal.

Composition du bouillon Fraser base :
Protéose peptone : 5,0
Tryptone : 5,0
Extrait de viande : 5,0
Extrait de levure : 5,0
Chlorure de sodium : 20,0
Hydrogénophosphate disodique 10 H₂O : 12,0
Dihydrogénophosphate de potassium : 1,35
Esculine : 1,0
Chlorure de lithium : 3,0
Contrôle du pH 7,2 ± 0,2 à 25 °C

C'est un supplément lyophilisé nécessaire pour la fabrication du milieu V.C.N.T (Vancomysine, Colistine, Nystatine, Trimethoprisme) 

Le milieu complet est utilisé dans le milieu séléctif des Neisseria spp grace aux multiples antibiotiques.

PRÉPARATION:

Reconstituer à l'aide de 5mL d'eau distillé stérile

Ajouter le contenu du flacon dans 500mL de milieu G.C (ref: 550.100005.46)

Stériliser puis ajouter 5% de sang de cheval défibriné cuit (chocolat) et 1 flacon Vitalex (ref: 550.080000.61)