Chromatographie

La chromatographie est une technique d’analyse dont l’objectif est de séparer les constituants d’un mélange complexe en vue de les identifier et de les quantifier. La méthode repose sur un principe d’interactions entre une phase stationnaire immobilisée dans une colonne, une phase mobile qui s’y écoule à travers et les différents solutés à séparer. En fonction de ces interactions, les constituants du mélange complexe à analyser vont « migrer » à des vitesses différentes dans la phase stationnaire.

Quelles sont les différentes techniques de chromatographie ?

Il existe différentes techniques de chromatographie qui se sont développées au cours du temps dont :

• Chromatographie sur Couche Mince (CCM) : repose sur un principe d’adsorption. Elle est constituée d’une plaque support (verre, aluminium ou plastique) sur laquelle est fixée une phase stationnaire. Le mélange à séparer est déposé sur la plaque qui est ensuite positionnée à la verticale dans une phase liquide. La phase liquide va remonter par capillarité et entrainer les composés qui se sépareront le long de la phase stationnaire.
• Chromatographie en phase liquide haute performance (HPLC) : appareil constitué d’une colonne remplie d’une phase stationnaire avec une granulométrie fine. La phase mobile a un débit élevé ce qui augmente la pression dans le système et entraine plus rapidement le mélange à séparer dans la phase stationnaire.
• Chromatographie en phase gazeuse : il s’agit d’une technique particulièrement adaptée aux composés volatils. Le mélange à séparer est chauffé pour passer d’un état liquide à gazeux puis entrainer dans la colonne contenant la phase stationnaire avec une phase mobile gazeuse (hélium ou azote) appelée gaz vecteur.
• Chromatographie sur colonne ouverte : la phase stationnaire est introduite dans une colonne en verre. Il s’agit d’une technique de chromatographie dite d’adsorption.

Quels sont les paramètres importants à prendre en compte pour obtenir une bonne séparation en chromatographie ?

• Taille de particules
• Polarité de la colonne
• Nature de la phase mobile
• Débit de la phase mobile
• Taille de la colonne
• Température

Préparation d’échantillon

La préparation d’un échantillon est une étape cruciale en chromatographie. Elle conditionne le résultat de l’analyse et peut influencer la durée de vie d’une colonne. Il existe une multitude de techniques pour la préparation d’échantillon dont :

• Extraction sur phase solide (SPE) : ou extraction solide-liquide. Il s’agit d’une méthode de purification et/ou de concentration des composés d’intérêts. Le mélange à purifier ou concentrer est injecté sur une petite colonne remplie de phase stationnaire. En fonction de l’affinité, l’analyte est soit capté par la phase stationnaire, soit rejeté avec la phase mobile.
• QuEChERS : (quick, Easy, Cheap, Efficient, Rugged and Safe) : c’est une technique utilisée en agroalimentaire dans le cadre de la recherche de résidus de pesticides dans les fruits ou légumes. Il s’agit d’une méthode d’extraction par centrifugation.